(1)麻痹性贝毒的分离提取
1)石房蛤毒素的提取 取石房蛤的水管或是贻贝的肝胰脏磨碎,以15%乙醇水溶液(用盐酸调至pH2.0提取3次,台并提取液减压浓缩得浓缩物。将浓缩物首先进行Amberlite(Na+型)交换树脂柱层析,用p4.0缓冲液洗去无毒组分,再以0.5 mL/L醋酸洗脱。洗脱液再通过Amberlite G-50(H+型)树脂柱,以0.1mol/L醋酸洗脱得强毒组分。最后将此强毒性组分进行酸性氧化铝层析或Biogel P-2柱层析,得到纯度较高的STX。
2)膝沟藻毒素的提取 取膝沟藻或蛤肝胰脏以稀酸醇水溶液提取,离心分离得上清液,减压浓缩后用氯仿脱去脂肪,过Biogel P-2或Sephadex G -15柱,先以水洗去无毒组分,再用,0.2mol/L醋酸洗脱得到有毒组分.最后以高压液相色谱分离,以醋酸溶液梯度洗脱,可依顺序得到GTX5,GTX4,GTXl,GTX3,GTX2,NeoSTX和STX。
(2)腹泻性贝毒的分离提取 取微藻或贝肉以匀浆器匀浆,用丙酮提取,过滤离心得丙酮提取液,减压蒸去丙酮,用pH3的微沸蒸馏水提取5 min,再用乙醚提取,减压蒸去乙醚,浓缩物悬于1%吐温60生理盐水中洗出,即为毒素提取液。
(3)西加鱼毒的分离提取 Tachibana等研究了从含西加毒素的裸胸鳝内脏中提取西加毒素的方法,其主要的步骤为:①收一定量的裸胸鳝内脏切碎,以丙酮提取;②提取过滤后,蒸去溶剂以乙醚-水分离,并以正己烷脱脂;③在不同色谱柱上分离,以不同溶液进行洗脱,得到不同组分的西加毒素。
Yasumoto等研究了从栉齿刺尾鱼内脏中提取刺尾鱼毒素的方法。首先取一定量的刺尾鱼内脏切碎,用乙醇提取,离心得醇提物,减压浓缩后,分别用乙醚、正丁醇和水提取。将水提取物浓缩,加入丙酮得到沉淀物。将该沉淀物溶于少量水中·在Sephadex G-100柱上分离,并以水洗脱,得到预提纯的刺尾鱼毒素,再经不同色谱柱,分离和洗脱可制备出较纯的刺尾鱼毒素。
从产生西加鱼毒的剧毒冈比甲藻中提取西加鱼毒的摹本步骤为:①收集天然或培养的剧毒冈比甲藻细胞,碾碎;②用甲醇或丙酮-甲醇作为溶剂进行提取;③将提取液进行过滤、浓缩、分离;④在不同溶剂体系中分配;⑤提取物经浓缩、蒸发、溶解、过滤后,在不同分离柱上进行分离提纯,得到不同组分的西加毒素。